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實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)巧規(guī)劃
梯度凝膠預(yù)實(shí)驗(yàn):若不確定目標(biāo)蛋白最佳分離濃度,可利用試劑盒少量試劑制作梯度凝膠進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。先將不同濃度凝膠溶液分層灌注,待聚合后進(jìn)行電泳,通過預(yù)實(shí)驗(yàn)快速確定分離的凝膠濃度,節(jié)省正式實(shí)驗(yàn)時(shí)間和試劑用量。
多膠同步制備:當(dāng)需同時(shí)處理多個(gè)樣品時(shí),根據(jù)試劑盒規(guī)格和電泳槽容量,可一次配制多份凝膠溶液,同時(shí)灌注多個(gè)凝膠。但要注意記錄好各凝膠對應(yīng)的樣品信息,避免混淆。如進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)差異表達(dá)分析,一次制備多個(gè)凝膠,可同步分析不同樣本,提高實(shí)驗(yàn)效率。
儀器配合提效率
恒溫設(shè)備輔助:在環(huán)境溫度不穩(wěn)定的情況下,使用恒溫平臺或水浴鍋保持凝膠溶液和電泳槽溫度恒定。如在寒冷環(huán)境中,將混合好的凝膠溶液放在 30℃恒溫平臺上,可加快凝膠聚合速度且保證聚合均勻性,避免因溫度過低導(dǎo)致的聚合異常。
離心機(jī)妙用:混合凝膠溶液后,若溶液中仍有少量難以排出的氣泡,可將盛放溶液的容器放入離心機(jī),以低速(如 1000 - 2000 rpm)離心 1 - 2 分鐘,使氣泡集中到溶液表面,方便去除。
細(xì)節(jié)把控保質(zhì)量
溶液預(yù)過濾:若懷疑預(yù)混試劑或添加的去離子水、緩沖液存在雜質(zhì),可使用 0.22μm 或 0.45μm 的濾膜對溶液進(jìn)行過濾后再配制凝膠。尤其在對條帶清晰度要求的實(shí)驗(yàn)中,過濾操作能有效去除可能影響蛋白質(zhì)遷移的微小顆粒,提高凝膠質(zhì)量。
加樣孔修復(fù):若拔梳子時(shí)不慎損壞加樣孔,可在電泳前用少量未聚合的凝膠溶液對破損處進(jìn)行修補(bǔ)。用微量移液器吸取凝膠溶液,小心滴加到破損加樣孔處,待其聚合后,可一定程度恢復(fù)加樣孔形狀,減少對樣品加樣和電泳結(jié)果的影響。
廢物處理有講究
試劑回收利用:試劑盒中未使用完且未受污染的試劑,如緩沖液等,可按照要求妥善保存,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的清洗或其他輔助步驟。但要注意,已混合的凝膠溶液不可回收,避免污染其他試劑。
環(huán)保處理:實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的廢棄凝膠和試劑,需按照實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)廢物處理規(guī)定進(jìn)行分類處置。聚丙烯酰胺凝膠雖低毒,但不可隨意丟棄,應(yīng)收集后進(jìn)行無害化處理;含 SDS 等化學(xué)試劑的廢液,需倒入指定的化學(xué)廢液收集容器,統(tǒng)一交由專業(yè)機(jī)構(gòu)處理,防止環(huán)境污染。
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