本文系統(tǒng)介紹Bio-Rad Amersham ImageQuant 800全自動Western blot檢測系統(tǒng)的技術(shù)創(chuàng)新。重點分析其高動態(tài)范圍CCD檢測系統(tǒng)、多色熒光檢測能力和智能化分析軟件,探討如何在保持Western blot特異性的同時實現(xiàn)精準(zhǔn)定量和高效通量。
正文:
傳統(tǒng)Western blot技術(shù)長期受限于定量準(zhǔn)確性差、操作流程繁瑣等問題。Bio-Rad Amersham ImageQuant 800系統(tǒng)通過技術(shù)創(chuàng)新,實現(xiàn)了Western blot實驗的自動化、定量化和高通量化。
該系統(tǒng)采用深度制冷的科學(xué)級CCD傳感器,動態(tài)范圍達(dá)到4.8OD,可同時檢測強(qiáng)信號和弱信號而不需要多次曝光。配合多激光光源系統(tǒng),支持Cy2、Cy3、Cy5三種熒光通道的同時檢測,實現(xiàn)多重蛋白質(zhì)分析。實驗數(shù)據(jù)顯示,其線性范圍比化學(xué)發(fā)光法擴(kuò)大100倍,定量準(zhǔn)確性提高5倍以上。
在自動化方面,系統(tǒng)集成自動對焦、自動曝光和自動圖像拼接功能,可連續(xù)處理多達(dá)100個膜而不需人工干預(yù)。智能分析軟件采用機(jī)器學(xué)習(xí)算法,自動識別條帶、扣除背景并進(jìn)行歸一化分析,將數(shù)據(jù)分析時間從數(shù)小時縮短至分鐘級。
應(yīng)用研究表明,在磷酸化蛋白質(zhì)定量分析中,該系統(tǒng)可準(zhǔn)確檢測到1.5倍以下的表達(dá)差異,遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)方法的2倍檢測限。在細(xì)胞信號通路研究中,多色熒光檢測功能允許在同一張膜上同時檢測總蛋白和磷酸化蛋白,不僅節(jié)省樣品,更提高了數(shù)據(jù)可比性。
關(guān)鍵詞: Western blot、蛋白質(zhì)定量、多色熒光、自動化檢測、圖像分析