LIPIDTOX™ 熒光染料在代謝性疾病研究中的脂滴動態(tài)定量分析應(yīng)用
內(nèi)容簡介: 本文系統(tǒng)評述了ENZO LIPIDTOX™ 系列中性脂熒光探針在細(xì)胞脂代謝研究中的關(guān)鍵技術(shù)優(yōu)勢。文章從脂滴(Lipid Droplet)的細(xì)胞生物學(xué)功能出發(fā),詳解了LIPIDTOX™ 染料相較于傳統(tǒng)油紅O染色、BODIPY™ 493/503染料的更高特異性、更優(yōu)信噪比及與多色熒光標(biāo)記的兼容性。重點探討了如何利用該工具結(jié)合高內(nèi)涵成像系統(tǒng)(HCS)定量分析肝細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等在代謝應(yīng)激下的脂滴數(shù)量、大小、體積變化,及其在NAFLD、動脈粥樣硬化、肥胖等研究中的應(yīng)用方案。
關(guān)鍵詞: 脂滴、LIPIDTOX™、熒光成像、高內(nèi)涵篩選(HCS)、代謝疾病
正文:
(正文約2100字,詳細(xì)闡述以下要點:
脂滴生物學(xué)重要性: 從惰性的能量儲存細(xì)胞器到活躍的代謝樞紐,參與脂質(zhì)代謝、膜合成、信號傳導(dǎo)。
現(xiàn)有染色方法對比:
油紅O: 半定量,僅限于固定細(xì)胞,不易進(jìn)行多標(biāo)記。
BODIPY™: 可能染色其他脂質(zhì)結(jié)構(gòu),存在光譜交叉。
LIPIDTOX™ 優(yōu)勢: 專一性結(jié)合中性脂(甘油三酯、膽固醇酯),多種顏色(如綠色、紅色、深紅色),適用于活細(xì)胞/固定細(xì)胞染色,與抗體標(biāo)記(如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)志物)、DAPI等共染。
實驗方案與定量分析:
染色條件優(yōu)化(濃度、時間、洗滌)。
使用高內(nèi)涵成像分析系統(tǒng),自動識別細(xì)胞,定量每個細(xì)胞的脂滴參數(shù):數(shù)量、平均直徑、總脂滴面積、 integrated intensity。
統(tǒng)計學(xué)分析比較不同處理組(如脂肪酸處理vs對照,藥物處理vs模型組)。
應(yīng)用實例:
非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD)模型: 在肝細(xì)胞系(HepG2)或原代肝細(xì)胞中誘導(dǎo)steatosis,并用潛在藥物干預(yù),定量脂滴積聚情況。
巨噬細(xì)胞泡沫化: 用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)處理巨噬細(xì)胞,模擬動脈粥樣硬化斑塊形成,研究清道夫受體功能及抗泡沫化藥物。
脂肪細(xì)胞分化: 追蹤3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化過程中脂滴的形成與融合動態(tài)。
結(jié)合其他檢測: 與 Seahorse 能量代謝分析、甘油及游離脂肪酸測定等生化方法聯(lián)用,多維度揭示細(xì)胞代謝狀態(tài)。